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禽流.感病毒H9亞型試劑盒

產品型號:

廠商性質:生產廠家

訪問量:1437

更新時間:2022-09-27

簡要描述:

禽流.感病毒H9亞型試劑盒(實時熒光PCR法)針對禽流.感病毒H9亞型基因組高度保守區(qū)域設計特異性引物和探針,在反應體系中含禽流.感病毒H9亞型基因組模板的情況下,PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結果的定性分析。

詳細說明:

禽.流感病毒H9亞型試劑盒(實時熒光PCR法)

【產品名稱】

通用名稱:禽流.感病毒H9亞型試劑盒(實時熒光PCR法)

英文名稱 Avian Influenza Virus H9 hemagglutinin subtypes Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】 25頭/ & 50頭/

【預期用途】

禽.流感病毒H9亞型試劑盒(實時熒光PCR法)適用于禽.流感病毒H9亞型檢測,可用于臨床禽.流感感病毒H9亞型感染的輔助診斷,但不作確診使用。

【檢驗原理】

禽.流感病毒H9亞型試劑盒(實時熒光PCR法)針對禽.流感病毒H9亞型基因組高度保守區(qū)域設計特異性引物和探針,在反應體系中含禽.流感病毒H9亞型基因組模板的情況下,PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結果的定性分析。

【主要組成成份】

序號

組成

25/

50/

1

禽.流感H9 RT-PCR反應液

375 μL×1

750 μL×1

2

禽.流感H9逆轉錄酶

50 μL×1

100 μL×1

3

禽.流感H9 Taq

75 μL×1

150 μL×1

4

禽.流感H9陽性對照

40 μL×1

40 μL×1

5

禽.流感H9陰性對照

40 μL×1

40 μL×1

6

說明書

1

1

注:陰性對照為禽類基因組DNA,陽性對照為失去活性的禽.流感病毒H9亞型cDNA

【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反復凍融,有效期12個月。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 Roche LightCycler R480Cepheid SmartCyclerRotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。

【樣本要求】

1.取咽喉拭子、泄殖腔拭子或血液樣本,禽肉取肌肉或內臟樣本,樣本處理方法參照相關文獻資料。

2.樣本采集后應立即檢測,若不能立即檢測,應置于-80℃冷凍保存,避免反復凍融,用干冰或液氮運輸。

【檢驗方法】

1. 試劑準備(試劑準備區(qū))

1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

2)核算當次實驗所需要的反應數(n),并根據如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數(1T+陽性對照數(1T+誤差預留量(1T+樣本數

單反液配制表()

RT-PCR反應液

15.0 μL

逆轉錄酶

2.0 μL

Taq

3.0 μL

3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。

2.樣本準備(樣本處理區(qū))

QIAGENRoche公司RNA提取試劑盒提取RNA,具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本RNA5 μl、終體積25 μl/管,蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品,終體積為25 μl/管,蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,轉移到PCR儀器上。

4.PCRPCR擴增區(qū))

1)取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應管,放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置,并記錄放置順序。

2)按下表設置儀器核酸擴增相關參數進行PCR擴增。

反應體積

25 μL

通道選擇

F.AM通道采集禽.流感病毒H9亞型熒光信號

PCR

反應

條件

步驟

條件

循環(huán)數

反轉錄

42℃:10分鐘(min

1

預變性

95℃:3分鐘(min

1

預擴增

95℃:5秒(s

5

55℃:40秒(s

PCR擴增

95℃:5秒(s

40

55℃:40秒(s

(此階段結束時采集熒光信號)

注:ABI系列熒光PCR儀在設置時不選ROX校正,設置淬滅基團選擇None【參考值(參考范圍)】

1.試劑盒有效性判定:

1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct≤35

2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數增長期。

2.標本結果判定:

1陽性:標本檢測結果Ct≤35或有明顯指數增長期。

2)可疑:標本檢測結果Ct值在3538范圍內。此時應對標本進行重復檢測,如重復實驗結果Ct值仍在3538范圍內,有明顯指數增長期,則判定為陽性,否則為陰性。

3)陰性:標本檢測結果Ct值>38或無Ct值。

【檢驗結果的解釋】

通道及檢測結果

標本檢測結果解釋

FAM

+

標本檢出禽.流感病毒H9亞型RNA

-

標本中未檢出禽.流感病毒H9亞型RNA

【檢驗方法的局限性】

1. 當檢測樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的*檢出*可能會發(fā)生假陰性的結果。

2. 被檢樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中操作方式不當容易造成RNA降解而產生假陰性結果。

3. 樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中發(fā)生交叉污染,則容易得到假陽性結果。

【產品性能指標】 產品的*檢出限為102 Copies/mL,產品CV≤5%

【注意事項】

1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器、耗材應獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。

2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。

3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。

4. 試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時離心。

5. 試劑盒內所配陰性和陽性對照在第1次使用前應全部轉移至標本準備區(qū),并單獨存放。

6. 為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記。

7. 儀器擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置;不同批號試劑不能混用。

8. ABI系列熒光定量PCR儀參數設置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None

9. 實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。






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